Concentration de protéine par A280
Calculateur
Résultats
- Concentration (mg/mL)
- 6.371814
- Concentration (µg/mL)
- 6,371.814092
- Protéine totale récupérée (mg)
- 3.185907
Résultats de biologie et laboratoire
| Concentration (mg/mL) | 6.371814 |
| Concentration (µg/mL) | 6,371.814092 |
| Protéine totale récupérée (mg) | 3.185907 |
Diagramme formula-map
- Concentration (mg/mL)
- 6.371814
- Concentration (µg/mL)
- 6,371.814092
- Protéine totale récupérée (mg)
- 3.185907
Décomposition de la formule
Formule
C (mg/mL) = A280 × dilution ÷ ε(0.1 %)= 6.3718140929535
Note
Modèle simplifié : ces résultats utilisent les relations de laboratoire classiques et des constantes moyennes (A260 = 1 pour 50 µg/mL d'ADN double brin, 617,96 g/mol par paire de bases, ~110 Da par acide aminé, croissance exponentielle idéale). Les échantillons réels varient selon la pureté, les contaminants, le tampon, la température et l'étalonnage de l'appareil. Vérifiez toujours avec vos propres étalons et votre protocole ; ne pas utiliser pour un usage diagnostique ou critique pour la sécurité.
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Voir tout →Questions fréquentes
Pourquoi utilise-t-on 280 nm pour mesurer la concentration de protéines ?+
Les acides aminés aromatiques, principalement le tryptophane et la tyrosine, ainsi que les ponts disulfures de la cystine, absorbent fortement la lumière ultraviolette près de 280 nm, donc l'absorbance à cette longueur d'onde varie selon la quantité de ces résidus présents dans l'échantillon.
Comment le calculateur convertit-il l'absorbance en concentration ?+
Il applique la loi de Beer-Lambert, concentration = A280 / (coefficient d'extinction x trajet optique), en utilisant le coefficient d'extinction molaire ou massique de la protéine que vous fournissez, car ce coefficient varie d'une protéine à l'autre selon sa teneur en résidus aromatiques.
Pourquoi ai-je besoin du coefficient d'extinction spécifique à ma protéine ?+
Comme la teneur en tryptophane, tyrosine et cystine diffère entre protéines, un facteur de conversion générique (contrairement au cas de l'ADN à A260) n'est pas précis ; utiliser un coefficient calculé à partir de la séquence réelle de votre protéine, ou déterminé expérimentalement, donne une concentration bien plus fiable.
Cette méthode peut-elle être utilisée pour un mélange de plusieurs protéines ?+
Pas de façon fiable pour une concentration absolue, car un mélange n'a pas de coefficient d'extinction unique ; l'A280 pour un échantillon mixte (comme un lysat brut) est mieux utilisée comme mesure relative de la protéine totale, ou associée à un dosage colorimétrique tel que Bradford ou BCA pour une valeur absolue.
Qu'est-ce qui peut faire surestimer la concentration de protéine par l'A280 ?+
Les contaminants absorbant aussi près de 280 nm, notamment les acides nucléiques résiduels, gonflent la lecture ; un rapport A260/A280 élevé est un signe de cette contamination, et une formule de correction pour les acides nucléiques ou une préparation plus propre doit être utilisée si ce rapport est élevé.