Concentration d'ADN par A260
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Résultats
- Concentration (µg/mL)
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- Concentration (ng/µL)
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- ADN total récupéré (µg)
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Résultats de biologie et laboratoire
| Concentration (µg/mL) | 650 |
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Diagramme formula-map
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Décomposition de la formule
Formule
C (µg/mL) = A260 × 50 × dilution factor (dsDNA, 1 cm path)= 650
Note
Modèle simplifié : ces résultats utilisent les relations de laboratoire classiques et des constantes moyennes (A260 = 1 pour 50 µg/mL d'ADN double brin, 617,96 g/mol par paire de bases, ~110 Da par acide aminé, croissance exponentielle idéale). Les échantillons réels varient selon la pureté, les contaminants, le tampon, la température et l'étalonnage de l'appareil. Vérifiez toujours avec vos propres étalons et votre protocole ; ne pas utiliser pour un usage diagnostique ou critique pour la sécurité.
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Voir tout →Questions fréquentes
Que mesure réellement la lecture A260 ?+
A260 est l'absorbance de la lumière ultraviolette à 260 nanomètres, la longueur d'onde à laquelle les bases puriques et pyrimidiques des acides nucléiques absorbent le plus fortement. Comme l'absorbance est proportionnelle à la concentration (loi de Beer-Lambert), elle sert d'indicateur de la quantité d'acide nucléique dans l'échantillon.
Quel est le facteur de conversion pour l'ADN double brin ?+
Une lecture A260 de 1,0 correspond à environ 50 microgrammes par millilitre d'ADN double brin, donc la concentration est égale à A260 x 50 x facteur de dilution. Cette constante diffère pour l'ADN simple brin (environ 33) et l'ARN (environ 40), assurez-vous donc d'utiliser la bonne selon le type d'échantillon.
Pourquoi tenir compte du facteur de dilution et du trajet optique ?+
Si l'échantillon a été dilué avant la lecture, ou si le trajet optique de la cuve ou de l'appareil n'est pas exactement de 1 cm, l'absorbance brute doit être corrigée avant d'appliquer la formule de concentration, sinon le résultat sera faussé de ce même facteur. La plupart des spectrophotomètres modernes normalisent automatiquement à un trajet de 1 cm, mais il vaut la peine de le vérifier.
Que révèle le rapport A260/A280 sur la pureté de l'échantillon ?+
Un rapport d'environ 1,8 indique un ADN double brin relativement pur, tandis qu'un rapport d'environ 2,0 est attendu pour de l'ARN pur ; un rapport nettement inférieur suggère une contamination par des protéines ou du phénol, qui absorbent fortement près de 280 nm.
Pourquoi un échantillon à faible concentration donne-t-il une lecture peu fiable ?+
En dessous d'environ 2 microgrammes par millilitre, les lectures d'absorbance sont dominées par le bruit de l'instrument et la relation de Beer-Lambert devient moins linéaire, donc les concentrations proches ou inférieures à ce seuil doivent être considérées comme approximatives, et un dosage par fluorescence est plus fiable à très faible concentration.